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Waters色谱柱开启和安装的步骤
 色谱柱开启和安装的推荐步骤:
 
使用新鲜洁净的水与乙腈。冲洗系统,确保系统干净,不含任何缓冲盐和污染物。
 
取用色谱柱时避免磕碰掉落。
 
将色谱柱入口端连接到系统上,柱出口端先不要连接,色谱柱身上有箭头标明正确流向。
 
在0.1 mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱,然后在2分钟内将流速升至0.5 mL/min。
 
当溶剂均匀的从柱出口端流出,停流速,将色谱柱出口端接到系统检测器上(这样可以避免气泡进入检测系统,并且可快速达到基线平衡)。
 
重启流速,按照步骤4的方法逐渐提高流速,至常规分析时所使用的流速。
 
参考柱效测试报告中的方法,使用该流动相条件平衡色谱柱,通常需要使用5-10倍柱体积的流动相,直至压力与基线稳定。
 
测试柱效。如果没有柱效测试报告中的分析物,请联系沃特世化学消耗品部门寻求支持,使用合适的浓度与进样量。柱效结果略低于柱效测试报告属正常情况。如结果明显偏低、峰形拖尾,提示色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态,需要进行故障排查。
 
当使用2.1 mm内径色谱柱时,建议优化系统以减少谱带展宽,包括:使用检测器微量流通池,减少进样器loop环体积,使用较小内径(如0.005''或0.12 mm)的系统管路。并确保管路与色谱柱连接恰当、无死体积。
 
当使用小颗粒填料(如2.5 um)短柱进行高效快速分离时,需要考虑以下因素:
 
确保管路与色谱柱连接恰当、无死体积,尽量优化系统减少谱带展宽;
 
提高采样频率至10点/秒以上;
 
较小粒径的色谱柱产生的柱压较高,而较小粒径要达到优色谱效率所需的线速度较高,请根据所用LC系统的实际情况调节流速;
 
可使用较高的柱温来补偿小颗粒造成的压力升高,例如40°C。使用杂化颗粒反相色谱柱时,可使用45°C或更高。
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