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高效液相色谱柱的维护和保养方法有哪些?
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更新时间：2025-12-01
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高效液相色谱柱作为HPLC系统的核心耗材，其寿命与检测精度直接相关，维护保养核心围绕“防污染、防损伤、防老化”展开，通过规范操作减少固定相流失、柱堵塞等问题，具体方法按“使用前-使用中-使用后-长期闲置”全流程拆解，兼顾实用性和专业性：
一、使用前：做好预处理，从源头保护色谱柱
柱活化与平衡：新柱或闲置超过1周的色谱柱，使用前需用流动相平衡30-60分钟（流速1.0mL/min），确保固定相充分浸润；反相柱（如C18）可先用甲醇/水（90:10）冲洗20柱体积，再切换至样品流动相，避免固定相干燥导致性能下降。若柱内保存溶剂与流动相不兼容（如正相柱用正己烷保存，流动相为甲醇），需用过渡溶剂梯度冲洗，防止溶剂互溶产生气泡或固定相塌陷。
样品与流动相净化：样品必须经0.22μm滤膜过滤，去除颗粒物、悬浮物，避免堵塞柱筛板；含高沸点杂质、蛋白、油脂的样品需提前通过固相萃取（SPE）等方法净化，防止杂质吸附在固定相上。流动相需超声脱气15-20分钟，去除气泡（气泡会导致柱压波动、峰形异常）；使用缓冲盐流动相时，需用高纯度水（如超纯水）配制，过滤后现配现用，避免盐类结晶堵塞色谱柱。
仪器状态检查：安装色谱柱前，清理进样口衬管、更换老化隔垫，避免隔垫碎屑、样品残留进入柱内；检查管路是否有泄漏、堵塞，确保柱前压力稳定；确认柱接头密封良好，选用匹配的石墨垫，避免载气泄漏或压力不均导致柱损伤。
二、使用中：规范操作，避免柱损伤
温度与压力控制：严格遵守色谱柱最高使用温度（反相柱通常≤60℃，正相柱≤80℃），避免高温加速固定相流失；柱压需控制在出厂推荐范围（通常≤40MPa），若压力突然升高超过30%，需立即停机排查（如过滤流动相、清洗进样口），避免压力过高导致固定相压实、柱床塌陷。升温速率建议≤10℃/min，避免温度骤升骤降破坏柱结构。
流动相使用规范：避免使用强腐蚀性溶剂（如浓盐酸、氢氧化钠），反相柱流动相pH范围需控制在2-8（特殊耐酸碱柱除外），超出范围会导致硅胶基质溶解、固定相水解。梯度洗脱时，有机相比例变化不宜过快（如每分钟变化≤10%），避免固定相急剧收缩或膨胀；含缓冲盐的流动相使用后，需及时用高比例水相冲洗，防止盐类结晶。
进样操作要求：进样量需匹配柱容量（常规C18柱进样量≤20μL），避免过载导致峰形拖尾、固定相污染；进样口温度设置合理，高于样品最高沸点10-20℃，但不超过柱最高使用温度，防止样品分解产生杂质污染色谱柱。避免连续进样高浓度、高污染样品，建议每进样10-20针后，用空白流动相冲洗10-15柱体积。
三、使用后：及时清洗，延长柱寿命
常规清洗流程：实验结束后，用流动相梯度冲洗色谱柱，去除残留样品和杂质。反相柱：先用甲醇/水（50:50）冲洗20柱体积，再用纯甲醇或乙腈冲洗30柱体积，去除强吸附性杂质；正相柱：用正己烷/异丙醇（90:10）冲洗20柱体积，再用纯正己烷保存。若样品含蛋白、油脂等难洗脱杂质，可在清洗流程中加入5-10%的四氢呋喃（THF），增强洗脱效果，但需注意THF对部分固定相的兼容性。
特殊污染处理：若柱压升高、峰形拖尾严重，可能是柱内污染，可进行深度清洗。反相柱：用甲醇→甲醇/THF（80:20）→甲醇→乙腈的顺序梯度冲洗，每步20柱体积；正相柱：用正己烷→正己烷/乙酸乙酯（50:50）→正己烷冲洗。禁止用强极性溶剂（如丙酮、二氯甲烷）冲洗正相柱，避免固定相流失。
保存方法：短期保存（1个月内）：反相柱用纯甲醇或乙腈密封保存，正相柱用正己烷保存，确保柱内无气泡；长期保存（超过1个月）：反相柱用甲醇/水（90:10）保存，正相柱用正己烷/异丙醇（95:5）保存，防止固定相干燥老化。保存时需将色谱柱两端用堵头密封，置于阴凉干燥处（温度5-30℃），避免阳光直射。
通过以上规范维护，高效液相色谱柱的使用寿命可延长至1000-2000次分析，同时保障检测数据的准确性和重复性，降低使用成本。不同类型色谱柱（如离子交换柱、手性柱）的维护方法需结合厂家说明书调整，重点关注流动相兼容性和固定相特性。
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