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如何选择适合特定分析任务的高效液相色谱柱?
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更新时间:2026-03-31
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一、先定核心:分离模式(第一步选大方向)
1.反相色谱(很常用,占80%常规分析)
适用:中低极性、弱极性、有机物、药物、添加剂、农残、香精、色素、食品添加剂
固定相:C18、C8、C4、苯基
流动相:甲醇/乙腈+水(加酸/缓冲盐)
👉绝大多数常规检测:优先C18
2.亲水色谱HILIC
适用:强极性物质、糖类、氨基酸、维生素、小分子亲水杂质、难保留反相不挂柱
固定相:氨基、硅胶、酰胺、zwitterion两性柱
👉反相不出峰/死时间出峰→换HILIC
3.正相色谱
适用:异构体、手性前体、油脂、烃类、非极性同分异构体
固定相:纯硅胶、氧化铝
流动相:正己烷/异丙醇等有机溶剂
4.离子交换色谱
适用:有机酸、无机阴阳离子、糖酸、水溶性离子化合物
固定相:阴离子/阳离子交换树脂
5.凝胶渗透GPC/体积排阻SEC
适用:高分子、蛋白、多糖、分子量分布测定
二、反相C18细选(日常90%任务看这里)
1.碳载量/封端与否
普通C18(封端):中性、弱极性样品,峰形好,硅羟基吸附小
高碳载C18:保留强,适合弱极性、难洗脱杂质
未封端C18/极性嵌入C18:适合含碱性基团、易拖尾样品
2.粒径(决定柱效+压力)
5μm:常规检测、国标通用、压力低、耐用(常规实验室的选择)
3μm:柱效更高,适合复杂组分分离
1.7/2μm(UPLC超高效):快速分析、高难度分离,需耐压仪器
3.孔径
100Å:小分子(药物、农残、添加剂)通用
300Å:多肽、蛋白、大分子
糖类/聚合物选更大孔径
4.柱长短搭配
150mm:常规快速分析
250mm:难分离、异构体、杂质多、国标经典柱
50–100mm:UPLC快速筛查
三、按「分析任务」直接匹配(拿来即用)
①食品添加剂、防腐剂、甜味剂
→C184.6×250mm5μm封端
(苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、甜蜜素、安赛蜜)
②农残、兽药残留、激素类
→高纯硅胶C18/苯基柱(抗基质干扰,杂质分离干净)
③维生素、水溶性强极性小分子
→反相保留差→HILIC氨基柱/酰胺柱
④糖类、糖醇、淀粉水解物
→氨基柱(HILIC)or钙型离子排阻柱
⑤有机酸(柠檬酸、苹果酸、乳酸)
→离子交换柱/有机酸专用分析柱
⑥蛋白、酶、多肽
→300Å孔径C18或SEC凝胶柱
⑦异构体、芳香族同分物
→苯基柱、PFP五氟苯基柱(选择性强)
四、关键避坑(选错直接拖尾、不出峰、分不开)
强极性小分子硬用C18→死时间出峰,完全不保留
碱性化合物用普通未封端C18→严重拖尾、峰畸形
高盐缓冲液长期走纯硅胶柱→柱床塌陷
UPLC方法直接换5μm常规柱→分离度崩盘、峰挤堆
糖类用C18→完全没保留
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