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色谱柱的平衡方法
   色谱柱在使用前,进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外,在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是zui佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。
  色谱柱的平衡方法:
  (1)首先用0.2ml/min的流速将色谱柱平衡过夜,然后将流速升高到1.0ml/min冲洗30分钟,以便将色谱柱的填料充分平衡至zui佳状态,这样可以保证色谱柱的使用寿命,并且保证在以后的使用中,获得分析结果的重现性。
  (2)平衡过程中,将流速缓慢地提高。
  (3)用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低,则需要较长的时间来平衡)。
  流动相的配制: 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点:
  (1)流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
  (2)流动相具有一定惰性,与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
  (3)流动相的黏度要尽量小,以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果;同时降低柱压降,延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
  (4 )流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。 如使用UV检测器,使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
  (5)流动相沸点不要太低,否则容易产生气泡,导致实验无法进行。
  (6)在流动相配制好后,一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
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